大鼠脑切片TTC染色后的照相技巧

时间:2016-12-12

提到照相,大家自然会想到照相机,用胶卷照相机近摄,需专业技巧,照完后不能立即见到结果。用数码照相机,相对方便多了,但价格不菲,而且每次照相时放大倍数难以固定、光线明暗度不同,把每次的照片组合在一起时,不协调。本人推荐的方法是用扫描仪照相,不用调焦、不用调光、以固定比例扫描,精度高。方法如下:

大鼠迅速断头、取脑(此过程不超过3 min),-20冷冻约15 min。待其稍变硬时,从冰箱取出,用切片机将两侧大脑半球切成厚1.5 mm的冠状切片(每只大鼠脑可切7-8片),浸泡于10 ml 1%TTC磷酸缓冲液中(0.2 M, pH 8.7),37避光孵育约15 min,此间将脑片的上下面翻转至少一次,以便两面染色一致,正常脑组织染为深红色,脑梗死区不染色(灰白色)。然后将脑片浸泡于1.5%多聚甲醛磷酸缓冲液(0.2 M, pH 7.4)内,4固定24 h后(最好不超过72 h,以免褪色),将每只大鼠的所有脑片按脑的前后顺序从左至右整齐排列在投影胶片上,将胶片放在扫描仪上,在脑片上轻轻放一块儿蓝色背景,注意不要使脑片移位。盖上扫描仪盖子,扫描即可。